Neurocentre Magendie


La Plateforme possède des équipements performants regroupés en quatre catégories : production et purification, centrifugeuses, techniques d'’analyse et interactions biomoléculaires.
Attention! L’utilisation de la majorité des instruments nécessite une formation préalable !


Production et purification

Un incubateur Innova 42 (Eppendorf) thermostaté avec contrôle de la température de 4 à 80ºC.
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Deux homogénéisateurs-broyeurs de cellules :
POLYTRON avec une sonde pouvant aller à 30000 rpm.
FastPrep24 (MP Biomedicals). Broyage des échantillons en quelques secondes à l'’aide de billes de tailles et composition différentes selon l'échantillon. Un large panel d’'échantillons peut donc être broyé (tissus, bactéries, cellules eucaryotes, os, bois…). Grâce à ses 3 rotors interchangeables, vous pouvez réaliser des préparations de 2mL, 15mL ou 50mL.
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Un électroporateur Micropulser (Biorad). Technique d'’introduction d’'ADN dans des cellules par application d’'un champ électrique.
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Le RTS Proteomaster (Roche) qui permet d’'obtenir de petites quantités de protéines sans avoir besoin d’'organisme producteur, seulement avec des Kits de chez Roche.
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Un système FPLC (Akta Purifier, GE Healthcare), réfrigéré à 4ºC, qui permet la réalisation de chromatographies liquides à haute performance pour une séparation précise et rapide des protéines.
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Centrifugeuses

Plusieurs types de centrifugeuses/ultracentrifugeuses (Beckman Coulter) sont disponibles sous réservation


Deux centrifugeuses

L'Avanti J25 (rotors J25.50 et JS13.1) et l’Allegra X-30 (centrifugeuse de paillasse, rotor SX4400).

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Deux ultracentrifugeuses de paillasse

L'Optima MAX XP et Optima TL100 (rotors TLA100, TLA100.3, TLS55 et TLA120.2).

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Deux ultracentrifugeuses

L'Optima L100XP (rotor 80T1, 50Ti, 70Ti et NVT90) et Optima LE80K réservée aux virus (rotor SW40Ti et 50.2Ti).

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Techniques d'analyse

La Plateforme est équipée du matériel nécessaire à la réalisation de gels d’'électrophorèse mono et bidimensionnelle et de Western Blots (Biorad).


Le Trans-Blot Turbo Transfert System (Biorad) permet un transfert des protéines sur membrane en 5 à 30 minutes en fonction du type de gel utilisé.
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La Plateforme possède différents systèmes d’analyse


Deux systèmes de détection permettant l’analyse de gel acrylamide et Blots par colorimétrie et chemi-luminescence. G:Box iChem (Syngene) et ChemiDoc MP (Biorad).
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Lecteur de plaque Plate reader Model 680 (Biorad) pour une mesure entre 400 et 750nm. Idéal pour les dosages de protéines par colorimétrie.
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Lecteur de plaque POLARstar Omega (BMG Labtech), lecteur multidétection évolutif et équipé d’un système d’injection pour une détection UV/Vis mais aussi fluorescence (FRET, polarisation), luminescence, et plaque LVis pour quantifier ADN, ARN et protéines par absorbance.
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Lecteur de plaque MAGPIX (Biorad), pour tests ELISA qui fonctionne avec des billes magnétiques et qui peut identifier et quantifier 50 molécules cibles par puit sur plaque 96 puits soit 4800 tests au total. De nombreux kits sont disponibles mais il vous est également possible de concevoir les vôtres.
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Un appareil de quantification des protéines basé sur une mesure dans l’'infrarouge : le Direct Detect Spectrometer (Merck Millipore). Seulement 2µL sont déposés sur une carte et la lecture se fait en moins de 5 minutes.
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Un Zetasizer uV (Malvern) permet la détermination de la taille (0.3-2000 nm) de protéines purifiées (taille et MW) ou de particules en cuvette ou sortie de colonne d’'exclusion stérique par DLS/SLS.
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Le Logiciel Ingenuity (QIAGEN).
Il s’'agit d’une banque annotée manuellement qui permet d’'analyser rapidement et d’'interpréter des données transcriptomiques et protéomiques. C'’est également un outil bibliographique très efficace.
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Le Nanodrop-one (Ozyme) quantifie et qualifie l'ADN, l'ARN et les échantillions de protéines avec seulement 1-2 µL.
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qNano (IZON) mesure directement le diamètre de la concentration et des particules (50nm to 10um).
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Interactions biomoléculaires

L'’appareil de titration calorimétrique isotherme (ITC, Isothermal Titration Calorimetry) de la Plateforme permet l’'analyse d’'interactions biomoléculaires par un procédé de biophysique de mesure d’'échange de chaleur.


Un ITC200 (Malvern) permet l’'étude d'’interactions biomoléculaires par titration calorimétrique isotherme. Cet appareil permet de déterminer la constante d’'affinité, la stœchiométrie et les paramètres thermodynamiques de la réaction à partir de partenaires purifiés (Protéines, peptides, sucres, lipides, ions métalliques, ADN, ARN, etc…)
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Ce système mesure la chaleur émise ou absorbée lors de l’'interaction entre les deux partenaires. La réaction peut être exothermique (libération de chaleur) ou endothermique (absorption de chaleur). L’'une des molécules est inject"e à intervalle r"gulier dans la cellule de mesure qui contient son partenaire jusqu’'à obtenir la saturation du site de liaison.
L’'intégration des pics permet d’'obtenir une courbe dont nous pourrons sortir la constante d’'affinité (Kd), la stoechiométrie (N) de la réaction et les paramètres thermodynamiques (ΔH et ΔS, enthalpie et entropie).




Systèmes de purification d'eau

Deux systèmes de purification d’'eau (Millipore) permettent d’'avoir à disposition de l’'eau distillée et de l’'eau MilliQ sur la Plateforme.
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